Cromatografia su colonna: separazione dei pigmenti fogliari

Principio

In questa indagine, un estratto grezzo di foglie fresche di colore verde uniforme viene prima separato in diverse frazioni mediante cromatografia su colonna. Per fare ciò, l’estratto viene aggiunto ad una colonna riempita di amido e fatto passare attraverso la colonna a pressione leggermente ridotta (per aumentare la portata della fase mobile) con ligroina come eluente. La separazione avviene in un’area gialla ampia e chiaramente riconoscibile e in una fascia verde stretta. Ciò significa che le xantofille (gialle) sono separate dalle clorofille (verdi). Se durante la separazione si riduce il vuoto, la separazione risulta molto migliore, ma in questo caso la separazione richiede anche molto più tempo. Ognuna delle frazioni di separazione può essere raccolta individualmente e caratterizzata registrando i relativi spettri di assorbimento, se necessario, oppure esaminata per la fluorescenza mediante radiazione con luce UV.

Vantaggi

• Ottimizzato per esperimenti dimostrativi: trasformazione dalla direzione orizzontale a quella verticale
• Pratica pompa a getto d’acqua per generare facilmente la pressione negativa richiesta
• Introduzione didattica ad un processo di separazione di base

Attivita’ proposte

Esamina i diversi pigmenti fogliari utilizzando la cromatografia su colonna.

Obiettivi formativi

• Clorofilla
• Cromatografia su colonna
• Pigmenti fogliari
• Xantofilla